クンショウモは、アミミドロ科クンショモ属（Pediastrum）の藻類で、池沼や水田などで普通に見つけることのできる微小生物である。1個体は8〜64個の偏平な細胞が互いに側面を接して1層にならび、群体をつくっている^1）。その名のとおり勲章の形をした美しい姿をしている。小学校と中学校のほとんどの教科書で紹介しており、身近な教材生物でもある。それにもかかわらず、大学生を対象に行ったアンケート調査（1990）では、80％を超える学生が実物を見たことがないと答えており、さらにその内の30％を超える学生がその名前も聞いたこともないと答えている^2）。クンショウモやボルボックスなど、美しい形をした微小生物を見れば、水の中の生命の姿に感動することと思うが、おそらく多くの学枚では、生きたクンショウモを観察する機会がないのであろう。学校でクンショウモを野外から採集して分離し、培養する場合、研究用に開発された合成培地を用いるのでは手間や費用がかかり、教育現場ではなかなか実践しにくい。これまで、ボルボックスの簡易培養法について検討した^3)、4)が、今回はクンショウモについて、学絞でも簡単にできる培養の方法を検討し、さらに培養した株の利用法について述べる。

クンショウモは、きまった数の細胞が集まってできた定数群体である。本研究では、東北大学法文系キャンパス内のコンクリート池から採集、分離されたPediastrum duplex（図1-A）および大型のクンショウモPediastrum sp.(図1-B)の２株を用いた。水蓮等、水草の植えられた池の水を、水垢とともに取り、分離、培養した。一般には、コンクリート池にはあまりいないようであるが、土が入り水草のあるような所では見つけることがある。採集には、池沼の水草や藻のかたまりを採取すると、一緒に入ることが多いようである。プランクトンネットよりも、ピペットで土や水草の表面の水垢を集めるほうが採集しやすい。

P. duplexは、1個体は8〜32細胞からなり、細胞間隙がある（図1-A）。細胞の直径は15〜20μmで、

Kazuyuki Mikami and Mariko Yumoto : Pediastrum, a live teaching material for aquatic environment education.

VT倍地やC借地での世代時間（娘群体が出てくるまでの時間）は２〜３日とされている^5）。P. sp. は、１個体は32〜64細胞からでき、群体全体の大きさは約200μmと大きい。そのため低倍率での観察や操作が容易であった。形態は、P. boryanum に似ているが、同種であるとの結論には至らなかった。大型であるため遊走子の出現や運動の様子についても観察が容易で、教材としては適していると考えられる。明瞭な細胞間隙を持たず、後述のように世代時間は、本研究での実験条件では約６日であった。

　デプレッションスライドグラス（縦2.6�p×横8.5�p×厚さ8�oのガラス製スライドグラスに直径2.2cm深さ6�oの穴が3個、横に並ぶ）の各穴に、約0.3mlの培養液を入れ、実体顕微鏡下でそれぞれ1個体を分離した（図2）。乾燥を防ぐためにカバーグラスを載せ、20±1℃で、12時間明期12時間暗期のサイクルで培養を行った。明期には、15Ｗ蛍光灯２本の下、約400μＷの光が当てられた。

　本研究でのクンショウモの培養は、これまで検討されたボルボックスについての結果を基に^3)、4）、コンビニエンスストアなどで購入できる天然ミネラルウォーターや煮沸した水道水に、園芸肥料のハイポネックス（液体ハイポネックス5-2-5； The Hyponex Company, U.S.A.）を加える方法を用いた。天然ミネラルウォーターとしては、「六甲のおいしい水」（国産）、「evian」（フランス産）または「Volvic」（フランス産）を用いた。

〈 図１ 〉クンショウモ

　　Ａ，Pediastum duplex　　　Ｂ，Pediastrum sp.　　　C, Pediastrum spの培養

〈 図２ 〉クンショウモの分離と培養

実体顕微鏡下での個体数の計測は、若い小さな群体も娘群体を持つ大きな群体もそれぞれ1個体として　扱い、１mlあたりの総個体数を算出した。

　これまでボルボックスの簡易培養法の検討結果を基に、クンショウモの簡易培養の検討を行った。園芸品店で購入できる園芸用肥料ハイポネックスを用いて、これまでいくつかの藻類（ミドリムシ Euglena gracilis やミカヅキモ Closterium）を培養できることが分かっている。そこで、脱イオン水に加えるハイポネックスの濃度を変えて、その溶液中でのP. duplexの増殖を調べた（図３）。クンショウモは、１個体を構成する細胞がそれぞれ分裂し、新たな娘群体となる。娘群体が生まれて4日後に、ハイポネックス培養液（0.01、0.1、0.25、0.5 ％）にそれぞれ１個体を分離し、８日間の増殖を調べた。図３の各値は、３個体の増殖結果の平均値である。その結果、ハイポネックスの濃度は 0.1％ または 0.25％ が最適であると考えられる。ただし、２週間以上経過すると、0.25％ 培養液では、壊れる細胞が見られ個体数は減少した。それぞれの個体を構成する細胞は、分裂（多くの場合、４回）して遊走子となり、一つの遊走子嚢を形成する。遊走子嚢は細胞壁内から出て、遊走子が集まって娘群体を形成する（図４）。0.01％、0.1％ および0.25％ 溶液では、親細胞から娘群体が生まれて4日後に、それぞれの培養液に分離された１個体は、その個体のそれぞれの細胞が、1日で娘固体になって外液に出たため、個体数は約16個となったと考えられる。0.1％ および0.25％ 溶液では、2度目の娘個体の形成が５〜６日日に起こることから、個体から個体が生ずる世代時間は、この培養条件では４〜５日といえる。

ックスを入れたもので増殖を調べた。天然ミネラルウォーターとしては、「六甲のおいしい水」、「evian」または「Volvic」の３種を用いた。ハイポネックスの濃度は、ボルボックスの培養で最適濃度とされた0.1%とした^3）。これらの培養液約0.3 mlに、親細胞から出て４日後の娘個体を、それぞれ１個づつ分離し、１週間の増殖を調べた（図４）。個々の数値は、３個体の平均値である。その結果、「六甲のおいしい水」や「Volvic」では増殖したが、「evian」の場合、増殖は見られなかった。

「evian」はボルボックスの培養に適さないことがわかっていたことから^4）、さらにミカヅキモ（Closterium ehrenbergii）についても調べてみた（表１）。

水の種類	0.1%ハイポ ネックス添加	培養液に入れられてからの日数
		1	3	7	9	10
六甲のおいしい水	有	1	2	6	8	11
	無	1	1	1	4	4
Evian	有	1	1	2	3	4
	無	1	1	1	2	2
Volvic	有	1	1	8	17	32
	無	1	2	4	7	7

この結果から、「evian」の場合は、ハイポネックスの添加の有無にかかわらず、クンショウモの場合と同様、増殖が悪いことがわかる。「evian」は他のミネラルウォーターに比べて、Ca²＋やMg²＋が多いためとも考えられる。市販のミネラルウォーターには、微小生物の培養に適すものと適さないものがあるようである。いずれにしてもクンショウモの培養には、一部の天然ミネラルウォーターか、煮沸した水道水に0.1％ハイポネックスを加えた培養液で、十分培養できることが分かった。

　池から分離された種未同定の大型のクンショウモ P. sp.（図1−B）は、観察が容易であることから生徒が扱うには、より適していると考えられる。そこで、同種の培養についても、P. duplexでの方法が使えるかどうかの検討を行った。光の条件として、連続明期と12時間明期−12時間暗期のサイクルで比較したところ、増殖速度は同じか、連続明期の方が、やや成績が良かった。そこで、親個体から出て１日後の娘個体を、培養液（「Volvic」に0.1％ハイポネックス）に入れ、連続明期で培養したところ（表２、図1−C）のようになった。なお、当然のことであるが、連続暗期に置いたものは全く増殖しなかった。この種は、この培養条件下で、約１週間の個体増殖サイクルを持つことがわかる。

　P. sp. の１個体は、一部は64細胞であるが、ほとんどの場合32細胞からできている。各細胞壁内で細胞は分裂し32個になり、一つの袋（遊走子嚢）の中で遊走子が形成される。遊走子が細胞外に出て娘個体を形成する過程は非常に劇的である。そこで、補助教材としてこれらの過程をビデオに収録した。このビデオ画面をプリントしたものが図５である。それまで動きの全くなかった細胞内で、鞭毛を持つ遊走子が活発に動く。間もなく遊走子は活発に動いたまま遊走子嚢は細胞外に出る。それぞれの遊走子は、自分の

　ナチュラルミネラルウォーターとして市販されている多くの水は、これら微小生物の暫定的な培養液として有効であると考えられる。ただ、これらの中でなぜ「evian」が適さないか、明確ではない。水に含まれる塩類等の組成から考えると、Ca²＋、Mg²＋および重炭酸塩が多い。重炭酸塩については、他の水での記載がないので比較はできないが、Mg²＋は際立って多い。市販天然ミネラルウォーターで培養を進めていくと、液の中に白濁を生じることが、しばしばある。これはミネラルウォーター中の成分が、後に加えられるハイポネックスの成分と結合して沈殿を生じたのかもしれない。